科室简介
  • 刘繁荣主任援非归国

    刘繁荣主任援非归国

  • 学习观看《永远在路上》

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  • 病理趣图

    病理趣图

edf壹定发病理科始建于1961年,经过50多年的建设和发展已成为省内一流的集诊断、教学、科研为一体的综合性科室。现拥有恒温冷冻切片机、全自动双缸脱水机、石蜡包埋机、全自动免疫组化染色机、液基细胞制片仪、十人共享多头显微镜、荧光显微镜等先进设备。 科室拥有布局合理,流程规范、管理现代化的空间600余平方米。设有病理诊断室、高级医生阅片室、取材室、制片室、免疫组化室、分子病理室、细胞穿刺室、资料室、会议室等。 查看详情

主任介绍
李里香,主任医师,硕导,从事病理工作20多年,擅长肿瘤病理诊断。 查看详情
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  • 免疫组织化学

    概述

    免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)

    基本原理

    抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。

    分类

    免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。

    这些常用免疫组织化学方法的原理如下:

    1. 免疫荧光细胞化学技术

    将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.

    2. 免疫酶细胞化学技术

    是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.

    3. 免疫胶体金技术

    就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究.

    作用

    标本

    实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

    其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

    抗体

    免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

    常用染色方法

    根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。

    操作步骤

    免疫组化(SP法)操作步骤

    1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

    2.缓冲液洗 3min/2 次。

    3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

    4. 缓冲液洗 5min/2 次。

    5. 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

    (注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)

    6. 缓冲液洗 5min/2 次。

    7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

    8. 缓冲液洗 5min/2 次。

    9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子),在室温下孵育 20 分钟。

    10 .缓冲液洗 5min/2 次。

    11 .滴加 HRP Polymer(酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。

    (注:HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

    12 .缓冲液洗 5min/2 次。

    13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混匀后滴加到切片上,孵育 3 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

    14 .自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。

    判定分析

    从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。

    意义

    近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%

    免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:

    ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断;

    ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位;

    ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型;

    ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的;

    ⑸发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定。

    ⑹为临床提供治疗方案的选择。


  •     FISH在乳腺癌中的应用

    1、检测项目:HER-2/neu基因、17号染色体数目

    临床意义:

    1)指导赫赛汀的使用;
    2)指导临床常规药物的应用:研究表明HER-2/neu基因扩增的病人用高剂量的蒽环类和紫杉醇类药物更有效;
    3)预后判断:HER-2/neu基因扩增的病人预后差,存在高复发率的危险。

    2、与常规的免疫组化检测项目相比的优势:

    1)免疫组化结果评判存在主观性,对于1+、2+结果存在不明确的可能;IHC存在10-20%的假阳性;5-10%的假阴性;
    2)免疫组化无法判断是因为HER-2/neu基因扩增还是由于17号染色体的非整倍性造成的蛋白表达,而17号染色体的非整倍性扩增的患者对于赫赛汀治疗效果不明显;FISH可以解决这一问题。
    3CISH的优点是在普通光镜下即可检查,但对低倍扩增及染色体非整倍扩增检测灵敏度下降

    3、乳腺癌患者TOP2A基因的检测临床意义:

    1)指导用药:TOP2A基因异常的乳腺癌患者对于含蒽环类药物的治疗方案更为敏感。TOP2A扩增的病人使用CEF方案进行治疗可以降低61%的复发风险和51%的死亡风险,而没有TOP2A扩增的患者使用CEF方案只能降低6%的复发风险和10%的死亡风险;
    2)判断预后:TOP2A基因异常的乳腺癌患者预后差,且TOP2A缺失的病人预后更差。

    4、与常规的免疫组化检测项目相比的优势:

    1)敏感性和特异性高;
    2)免疫组化法不能检测TOP2A基因的缺失,而FISH技术可以精确的判断基因的扩增或缺失。

  • 术中快速冰冻切片病理诊断

    一、 概述  

        手术中快速活体组织病理学检查(简称快速活检、快速冰冻切片)是临床医师在实施手术过程中,就与手术方案有关的疾病诊断问题请求病理医师进行的紧急会诊,极大地有利于病人的手术及预后,尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。快速活检要求病理医师在很短时间内(约30分钟),向手术医师提供的参考性病理学诊断意见。与常规石蜡切片相比,快速活检有一定局限性和误诊的可能性。有的病例难以快速诊断、或是诊断难以具体化,需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。临床医师应于手术前向患者和(或)患者授权人说明快速活检的意义和局限性等,取得患方的知情和理解。患方应在《手术中快速活检患方知情同意书》签署意见和签名。主持手术的医师应在手术前一天向病理科递交快速活检申请单,填写患者的病史,重要的影像学、实验室检查和提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。快速活检应有经过该项工作训练的主治医师以上的病理医师主持。病理医师有权了解患者的临床情况、手术所见、既往有关的病理学检查等情况。标本无需固定、直接送检,冰冻切片剩余的冷冻组织(冻对)和冰冻切片取材后剩余、未曾冷冻的组织(冻剩)均会制备石蜡切片。当冰冻切片病理诊断意见与常规石蜡-HE切片病理诊断不一致时,一般应以后者为准。

    二、适用范围

    1、需要确定病变性质(如肿瘤或非肿瘤、良性肿瘤或恶性肿瘤等),以决定手术方案的标本。

    2、了解恶性肿瘤的扩散情况,包括在是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。

    3、确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。

    4、确定切除的组织、例如甲状旁腺、输卵管、输精管、及异位组织等。

    三、慎用范围

    涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者,其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。  

    四、不宜应用范围

    1、疑为恶性淋巴瘤。

    2、过小的标本(检材长径<5px者)

    3、术前易于进行常规活检者

    4、脂肪组织、骨组织和钙化组织。

    5、需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。

    6、主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。

    7、已知具有传染性的标本(例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等)。


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